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  • 923999铁算盘心水论坛,蔗糖致死基因SacB在基因缺失反向筛选象征
来源:本站原创  作者:admin  更新时间:2020-01-19  浏览次数:

  【原则】本发现涉及一种蔗糖致死基因SacB在基因缺失反向筛选标记中的使用及其无痕缺失自杀载体,本发掘应用sacB基因编码蔗糖果聚糖酶,该酶能催化蔗糖水解成葡萄糖和果糖,况且将果糖团聚成高分子量的果聚糖,但高分子量果聚糖储积对细胞生活潜在的毒性感导,可酿成细胞仙游。以是利用蔗糖致死基因SacB构修寻短见载体,无需经历抗性基因来代庖方针基因,禁绝了抗性标识对卑鄙基因产生任何可以的极性作用,对鸭疫里默氏杆菌基因的功效研商具有告急途理。

  (19)中华国民共和国国家常识产权局 (12)出现专利申请 (10)申请颁发号 (43)申请发表日 (21)申请号 9.8 (22)申请日 2018.02.26 (71)申请人 四川农业大学 地方 611100 四川省成都会温江区惠民路 211号 (72)涌现人 刘马峰黄月罗睿心程安春汪铭书朱德康 (74)专利代劳机构 成都玖和学问产权代理事务所(平素合伙) 51238 代理人 胡琳梅 (51)Int.Cl. C12N 15 /74 (2006.01) (54)发现名称 蔗糖致死基因SacB在基因缺失反向筛选象征中的诈欺及其无痕缺失自戕载体 (57)大纲 本展现涉及一种蔗糖致死基因SacB在基因缺失反向筛选标志中的应用及其无痕缺失自杀载体,本发明诈骗sacB基因编码蔗糖果聚糖酶,该酶能催化蔗糖水解成葡萄糖和果糖,况且将果糖团圆成高分子量的果聚糖,但高分子量果聚糖积累对细胞存在潜在的毒性陶染,可变成细胞亡故。以是应用蔗糖致死基因SacB构修自裁载体,无需原委抗性基因来庖代目的基因,遏制了抗性记号对卑鄙基因形成任何可以的极性作用,对鸭疫里默氏杆菌基因的性能研究具有紧急意义。 权利央求书1页 声明书4页序列表2页 附图6页 CN 108504675 A 2018.09.07 CN 108504675 A 1.蔗糖致死基因SacB在算作基因缺失反向筛选记号中的操纵。 2.含有蔗糖致死基因SacB的无痕缺失自裁载体,其特性在于:所述无痕缺失自裁载体由蔗糖致死基因SacB克隆至穿梭质粒pLMF02的NcoI和XhoI酶切位点处,得质粒pLMF02:: SacB,尔后将复制开始位点pRA0726ori用oriT片段更换。 3.依照权柄要求2所述含有蔗糖致死基因SacB的无痕缺失自戕载体,其特点在于:所述蔗糖致死基因SacB由以下次序制得,以质粒pEX18GM为模板,SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为引物举办PCR扩增而得。 4.按照权柄乞请3所述含有蔗糖致死基因SacB的无痕缺失自尽载体,其特点在于:所述 PCR扩增的条件如下:98℃预变性30s;98℃变性10s,55℃退火30s,72℃延迟1min30s,循环 30次;末端72℃后延伸7min,16℃生计。 5.凭据权利恳求2所述含有蔗糖致死基因SacB的无痕缺失自戕载体,其特质在于:所述oriT片段由以下次序制得:以pEX18GM为模板,以SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示序列为引物举办PCR扩增,深圳神童云书包,大公网副总编辑史利伟:以突出中华守旧文化转动得oriT片段。 6.依照权力仰求2所述含有蔗糖致死基因SacB的无痕缺失自杀载体,其特质在于:所述自戕载体中oriT片段源委HindIII和PstI酶切位点更换质粒pLMF02::SacB的复制开始位点pRA0726 ori。 7.权利哀告2~6任一项所述无痕缺失寻短见载体在鸭疫里默氏杆菌基因的无痕缺失中的运用。 权柄哀求书 1/1 页 CN 108504675 A 2 蔗糖致死基因SacB在基因缺失反向筛选标记中的诈欺及其无痕缺失自戕载体 技巧规模 [0001] 本出现属于生物技能范围,涉及蔗糖致死基因SacB在基因缺失反向筛选标识中的诈骗,还涉及含有蔗糖致死基因SacB的无痕缺失自裁载体。 配景手腕 [0002] 基因敲除是研究细菌基因效用的一种吃紧程序,搜求对鸭疫里默氏杆菌基因功能的研商。而基因敲除的步调急急搜求由抗性基因介导的有痕缺失,以及由反向筛选基因介导的无痕缺失。今朝用于鸭疫里默氏杆菌基因缺失的方法急急是有痕缺失,而有